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PCR儀中的PCR反應過程你知道嗎?

發布時間: 2020-05-06  點擊次數: 1791次
   PCR儀根據DNA擴增的目的和檢測的標準可以分普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR以及實時熒光定量PCR儀等幾類。
  一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。主要應用于科研、教學、臨床醫學、檢驗、檢疫等。
  PCR儀的PCR反應過程與細胞內的DNA復制相似,但PCR的反應體系要簡單的多,主要包括DNA靶序列、引物、4種單核苷酸dNTP、耐熱DNA聚合酶以及合適的緩沖液體系。
  PCR反應過程有以下3個步驟:
  1.變性
  將反應體系混合物加熱到94℃,維持較短時間(大約15-30 s),使目標DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,形成單鏈DNA作為反應模板。
  2.退火
  將反應體系冷卻至特定的溫度(引物的TM值左右或以下),引物與DNA模板的互補區結合,形成模板引物復合物。
  3.延伸
  將反應體系的溫度提高到72℃并維持一段時間,引物在耐熱聚合酶的作用下,以引物為固定起點,以4種單核苷酸(dNTP)作為底物合成新的DNA鏈。
  以上三步驟作為一個循環重復的進行,每一循環的產物作為下一循環的模板。如此循環數十次,從而使目的基因得到指數級擴增,達到檢測或獲取基因的目的。
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